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尿液 RNA 该如何提取?

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BIOG特点
◎提取 RNA 纯度高,无抑制剂,A260/A280 为 1.8-2.0;
◎产率高,同样的样本量提取的 RNA 更多;
◎可用于尿液样本中 RNA 的提取,提取后的 RNA 可用于核酸检测使用;
◎不含苯酚和氯仿等有毒溶剂,安全无毒。
BIOG介绍
BIOG RNA Urine Kit 采用了最新的优质进口离子膜,裂解液和洗脱液经过多次优化,能高效地分离 RNA。提取得到的 RNA 较其它品牌的同类试剂盒产量更大,纯度更高,最大限度地去除了蛋白、色素、脂类、DNA 等杂质污染,可以直接应用于 Northern 杂交、RT-PCR、Real Time RT-PCR、cDNA 文库构建、体外翻译等各种常规分子生物学实验。
操作步骤
1. 请自行准备:无水乙醇、生理盐水、10mL 无 RNA 酶离心管、1.5mL 无 RNA 酶离心管。
2. 取出析出液和洗涤液,按以下操作:
a) 析出液:4.5mL 加入 25.5mL 无水乙醇,混匀;9mL 加入 51mL 无水乙醇,混匀。
b) 洗涤液:9mL 加入 21mL 无水乙醇,混匀;18mL 加入 42mL 无水乙醇,混匀。
c) 配制好的析出液及洗涤液如出现沉淀,可在 37℃溶解,摇匀后使用。
3. 取尿液 5mL(尿液的取用量在 1-5mL 范围内)置于 10mL 无 RNA 酶离心管中,5000 rpm 离心 5 分钟,小心弃上清,向离心管中加入 2mL
生理盐水,轻轻振荡混匀,5000 rpm 离心 5 min,弃 1900μL 上清,剩余 100μL 上清,振荡混匀。
4. 加入 200μL 裂解液和 20μL 消化液,振荡混匀,56℃水浴 10 分钟。
5. 加入 500μL 析出液,轻轻颠倒混匀,如有半透明悬浮物,不影响 RNA 的提取与后续实验。
6. 将吸附柱放入收集管内,将上述溶液转入吸附柱内,静置 2 min,12,000 rpm 4℃离心 1 min,弃收集管内废液。
7. 将吸附柱放回收集管内,加 500μL 洗涤液至吸附柱内,静置 2 min,12,000 rpm 4℃离心 1 min,弃收集管内废液。
8. 将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm 4℃离心 2 min,离去残留的洗涤液。
9. 取出吸附柱,放入新的 1.5 mL 无 RNA 酶离心管内,加入 30-60 μL 洗脱液,静置 3 min,12,000 rpm 4℃ 离心 2 min,收集 RNA 溶液。
提取的 RNA 即可用于下一步实验或-70℃保存。


1楼2021-08-30 09:38回复