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全血 RNA 提取步骤

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BIOG产品特点
◎操作简便快速,可在半小时内完成血液 RNA 提取;
◎最大限度地去除了血红素、细胞碎片等杂质污染,提取的
RNA 纯度高,A260/A280 为 1.8-2.0;
◎RNA 提取得率高,可在 2mL 的全血中提取 50μg 以上基
因组 RNA;
◎不含苯酚和氯仿等有毒溶剂,安全无毒。
操作步骤
1. 请自行准备:无水乙醇、无 RNA 酶的 15mL 离心管。
2. 取出洗涤液,按以下操作:
洗涤液:10mL 加入 24mL 无水乙醇,混匀;20mL 加入 48mL 无水乙醇,混匀。
3. 取 15mL 无 RNA 酶离心管(自备)1 支,加入 2mL 裂解液,再加入 2mL 已经解冻或新鲜的血液,(冷藏血液需先轻振混匀后再加入),
轻轻颠倒混匀 8 次,再加入 200μL 消化液及 100 μL 溶液 A,充分温和振荡混匀,56℃水浴 10 分钟。 如是凝血块,可取相当于 2mL
血液量的 5x5x5mm 大小的凝血块放入 15mL 无 RNA 酶离心管,用枪头反复敲打挤压至 1x1x1mm 以内大小,再加入 2mL 裂解液,震荡
混匀 1 分钟,56℃水浴 20 分钟。
注意:提取血液量建议在 1mL-3mL,裂解液随血液量增减。如提取血凝块,请尽量打碎后再加裂解液并适当延长消化时间。
4. 取出离心管,室温放置 2 分钟。加入 3mL 无水乙醇(自备),轻轻颠倒混匀 8 次,如有半透明悬浮物,不影响 RNA 的提取与后续实验。
5. 将吸附柱放入收集管内,将 3625 μL 上述溶液转入吸附柱内,静置 2 分钟,5,000 rpm 离心 2 分钟,弃收集管内废液。
6. 将吸附柱放入收集管内,将剩余 3625 μL 上述溶液转入吸附柱内,重复步骤 5。
7. 将吸附柱放回收集管内,加 3mL 洗涤液至吸附柱内,静置 2 分钟,5,000 rpm 离心 1 分钟,弃收集管内废液。
8. 将吸附柱放回收集管内,5,000 rpm 离心 2 分钟,离去残留的洗涤液。
9. 取出吸附柱,放入新的 15 mL 无 RNA 酶收集管内,加入 300 μL 洗脱液,静置 3 分钟,5,000 rpm 4℃ 离心 3 分钟,收集 RNA 溶液。
提取得到的 RNA 即可用于下一步实验或-20℃保存。

注意事项:
1. 洗涤液含有刺激性化学物质,操作过程请做好防护措施,避免直接接触皮肤,防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛,请立即用清水或生
理盐水冲洗,必要时请就医。2. 裂解液如有白色絮状物析出属正常现象,置于 37℃水浴中溶解即可。


1楼2021-06-17 16:50回复