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细胞DNA如何提取最好

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BIOG产品特点
◎操作简便快速,可在 30 分钟内获得理想的 DNA,适用于一次处理较多样本的批量提取;
◎提取 DNA 纯度高,无抑制剂,A260/A280 为 1.7-1.9
◎采用自主研发的改性硅基磁珠,同样的样本量提取的 DNA更多。
BIOG操作步骤
1. 请自行准备:无水乙醇、异丙醇、PBS、1.5mL 离心管。
2. 取出洗涤液,按 70%比例加入无水乙醇,如 9mL 加入 21mL 无水乙醇,18mL 加入 42mL 无水乙醇,混匀。
3. 细胞处理:a) 培养的贴壁细胞,先用胰酶消化,处理为细胞悬液,转移至 1.5ml 离心管,1,000 rpm 离心 5 分钟,彻底弃去上清,
加入 100μL PBS 振荡至细胞悬浮;b) 培养的悬浮细胞,转移至 1.5ml 离心管,1,000 rpm 离心 5 分钟,彻底弃去上清,加
入 100μL PBS 振荡至细胞悬浮。
4. 加入 200μL 裂解液,20μL 消化液,振荡混匀,56℃温育 10 分钟至细胞完全裂解。
5. 冷却到室温,加入 300μL 异丙醇,充分混匀,再加入 20μL 磁珠复合液(每次使用前须充分混匀),振荡混匀 3min(注意不要颠倒混匀,
以防磁珠粘附于管盖内壁),静置 2min。
6. 将离心管置于磁力架上放置约 20s 至磁珠完全吸附,开盖,彻底吸弃上清液(注意枪头不要接触磁珠)。.
7. 加入 600μL 配制后的洗涤液,将离心管从磁力架上取下,充分振荡 2min,确保磁珠完全分散。将离心管置于磁力架上放置约 20s 至磁珠
完全吸附,开盖,彻底吸弃上清液(注意枪头不要接触磁珠)。
8. 将离心管从磁力架上取下,开盖,干燥约 3-5min,至无明显乙醇气味。
9. 加入 50-100 μL 洗脱液,振荡至磁珠充分散开,室温静置 2min,再振荡混匀 1min。
10. 将离心管置于磁力架上,待磁珠完全吸附后,小心吸取上清液至一新的 1.5mL 离心管中,提取的核酸可直接用于下游实验,或-20℃保存
备用。
注意事项:
1. 裂解液含有刺激性化学物质,操作过程请做好防护措施,避免直接接触皮肤,洗涤液在使用前应加入无水乙醇后充分混匀。
2. .提取所用细胞量建议不高于 10 7 。


1楼2021-06-04 11:50回复