一．FISH的定义 荧光原位杂交技术（FISH）是一种利用荧光信号检测探针的原位杂交技术[1]。它将荧光信号的高灵敏度、安全性及直观性和原位杂交的高特异性结合起来，通过荧光标记的核酸探针与待测样本核酸进行原位杂交。在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数，从而对染色体或基因异常的细胞和组织样本进行检测和诊断，为各种基因相关疾病的分型、预前和预后提供准确的依据。 二．FISH的原理 FISH分为直接法和间接法。 直接法是在已知碱基

分子克隆实验——无缝克隆 今天和大家讲讲无缝克隆常见的问题以及解决方法。 1.平板上很少或者没有克隆菌落 建议使用试剂盒附带的阳性对照，可排除试剂盒本身的影响。进一步判定，主要有以下可能的情况和建议： 01载体制备 线性化载体和插入片段的纯度不够，抑制反应。 02插入片段制备 1、引物设计不正确：同源臂15~25nt（不计算酶切位点）,CG含量40~60%。 2、线性化载体和插入片段的纯度不够，抑制反应。若线性化载体与插入片段已经过纯化，

脾细胞是ELISpot和FluoroSpot测定中使用最多的细胞，至少对小鼠和大鼠样本而言是如此。脾细胞可以很容易地从脾脏中分离出来，而不需要Ficoll分离。细胞可以在分离后直接使用，也可以冷冻保存，并在以后批量使用。 下面是编译自https://www.mabtech.com/knowledge-hub/isolation-freezing-and-tha的关于如何最好地（i）分离、（ii）冻存和（iii）复苏脾细胞的详细指南。 脾细胞的分离 材料 细胞过滤器，70µm尼龙，无菌 无菌剪刀和镊子或镊子 无菌培养皿 巴氏移液管，无

脾细胞是ELISpot和FluoroSpot测定中使用最多的细胞，至少对小鼠和大鼠样本而言是如此。脾细胞可以很容易地从脾脏中分离出来，而不需要Ficoll分离。细胞可以在分离后直接使用，也可以冷冻保存，并在以后批量使用。 下面是编译自https://www.mabtech.com/knowledge-hub/isolation-freezing-and-tha的关于如何最好地（i）分离、（ii）冻存和（iii）复苏脾细胞的详细指南。 脾细胞的分离 材料 细胞过滤器，70µm尼龙，无菌 无菌剪刀和镊子或镊子 无菌培养皿 巴氏移液管，无

谁知道哪家机构可以做植物染色吗？

因为有两个数据重复了，想要删除一个，隐藏也可以 有没有大佬指点一下 感谢

常见的BCA法检测蛋白定量 在蛋白质比色定量试验中，最常用的方法是二喹啉甲酸（Bicinchoninic acid，BCA）法蛋白定量。那么为什么我们要选择用BCA法？BCA法是Lowry测定法的一种改进方法，与Lowery法相比，BCA蛋白测定方法操作更简单，试剂及其形成的颜色复合物稳定性更好，几乎没有干扰物质的影响，灵敏度高（微量检测可达到0.5μg/ml），应用更加灵活。与Bradford法相比，BCA法的显著优点是不受去垢剂的影响。 BCA法蛋白定量的原理是什么？ 大多数蛋白样

这是一个奇怪的问题，也是平时用的不多的问题，经常是离心3500rpm、5min或者1500rpm、5min或3000rpm、15min，但是有的文献显示需要离心力为400g（离心尿液），那么400g的离心力是不是等于1500rpm呢？今天就来说说这个问题，看看是不是您想要知道的答案。 PART01：什么是离心力？ ★在牛顿力学中，离心力是一种惯性力（也称为“虚拟力”或“伪力”），当在旋转的参照系中观察时，它看似作用于所有物体，它被指向远离平行于旋转轴并通过坐标系原点的轴。

请问，大佬，怎么用mega构建系统发育树。

这是一个奇怪的问题，也是平时用的不多的问题，经常是离心3500rpm、5min或者1500rpm、5min或3000rpm、15min，但是有的文献显示需要离心力为400g（离心尿液），那么400g的离心力是不是等于1500rpm呢？今天就来说说这个问题，看看是不是您想要知道的答案。 ★在牛顿力学中，离心力是一种惯性力（也称为“虚拟力”或“伪力”），当在旋转的参照系中观察时，它看似作用于所有物体，它被指向远离平行于旋转轴并通过坐标系原点的轴。 ★离心技术的原理是利

舒泰，一种对于实验动物相对安全的麻醉剂 舒泰是一种较安全的麻醉剂，多用于犬、猫和野生动物的全身麻醉。 舒泰是由肌松剂左拉西泮和镇静剂替来他明以1∶1 的比例合成的混合物，通常能提供30 min左右的外科麻醉时间。 舒泰中起到麻醉主导作用的是替来他明，替来他明主要抑制丘脑和新皮质系统，可选择性地阻断痛觉冲动传导，使痛觉消失。舒泰具有诱导期迅速而平稳、不良反应小、止痛效果强等特点。在低剂量下对大鼠、小鼠有兴奋作用，高

自学生物信息，现在在做微生物物种分类这块，用kraken2做的。自己练习的话服务器实在开不起，有没有大佬有分析过的k2report文件不用的，可以发我一份吗，手头没素材练习了，不胜感激！！！

活性氧（ROS）的流式检测通常是通过使用荧光探针如DCFH-DA来监测细胞内活性氧水平的变化。以下是该检测方法的一些关键步骤和原理： 01选择荧光探针常用的荧光染料是DCFH-DA，它能够进入细胞并在细胞内被酯酶水解成DCFH。DCFH随后可以被细胞内的活性氧氧化，生成发荧光的DCF。 02DCFH-DA是一种用于检测活性氧ROS的荧光探针，全称为2,7-二氯荧光素二乙酸酯。其工作原理为：DCFH-DA本身没有荧光，但可以自由穿过细胞膜，一旦进入细胞，它会被细胞内的酯

质粒是染色体外能够进行自主复制的遗传单位，当前通常用其来特指细菌、真菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体以外的 DNA分子。在基因工程领域，质粒常常被当做基因的载体使用。在分子生物学中，质粒 DNA被当做基因运载工具具有非常广泛的应用。 在细菌中提取质粒DNA通常按照以下步骤进行: 第一步，培养细菌，使质粒扩增; 第二步，进行细菌的收集和裂解; 第三步，质粒 DNA的分离和纯化。 在质粒DNA的提取过程中，其提取效果和其大小呈现出正比

Western blot是一个非常基础的实验，但是着实让我们头疼，即使是老手也挡不住WB实验的千锤百炼，懂得都懂，下面小编根据经验总结一篇WB实验过程会遇到的常见问题及解决方案，希望对正在做WB实验的小伙伴提供一个避雷参考！ 无条带 1.蛋白表达量低：充分了解研究的蛋白，表达量低适当增加上样量，20-50μg。 2.本底表达还是诱导表达，非特异性条带。 3.样本提取蛋白使用蛋白酶抑制剂，磷酸酶抑制剂，并设置对照，避免蛋白降解。 4.检查一抗特异性

凡是需要做分子生物学实验的lab，肯定逃不了要买一台核酸定量的机器。目前最为流行的仪器是Nanodrop One，只需滴加一两微升的样品，按一下按钮，利用核酸的紫外吸收特性，即可得到浓度数据。近几年，以Qubit 4为代表的基于特异荧光染料法的仪器也逐渐进入科研人员的视野。那么，这两类仪器有什么区别，在使用时需要注意什么，如何根据实验室需求来选购？且听分解。 首先我们需要来理解两台仪器在核酸定量原理上的区别。正如方才所言，Nanodro

请问rast网站进不去，知道咋解决吗？

1载体构建错误 这个屡见不鲜，很多克隆新人经常弄错读码框。比如Qiagen的pQE系列载体，其克隆位点常有一两个碱基的区别；另外有些酶产生粘端有些酶产生平端，这些都容易导致读码框错误，从而表达不出来。 2宿主菌选择不当 不同的宿主菌其基因型是不一样的。有些经过特殊修饰的载体，或者特殊用途的载体，或者有特殊启动子的载体，必须选择合适的宿主菌进行表达。因此，当你的蛋白没有表达出来时，可以考虑更换宿主菌。 3密码子的使用频

免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术 (immunocytochemistry) 是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原 (多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究。它是组织化学的分支，它是用标记的特异性抗体 (或抗原) 对组织内抗原 (或抗体) 的分布进行组织和细胞原位检测技术。 一、免疫组化技术的基本原理 应用免疫学及组织

实验室一个师弟 qPCR、RT-PCR 没分清，论文盲审没通过，面临延毕...... 在此整理了一张 PCR 实验定义表格，大家一定要分清呀 👇 除了上述几种 PCR 以外，还有哪些常用的 PCR 实验呢？趁此机会一起来了解下吧～ 多重 PCR 普通 PCR 仅对单一基因进行定性或半定量，对多个基因进行检测时需要分为多个独立体系进行扩增，虽操作简单，但工作量大，耗时耗力浪费样本及试剂。 而多重 PCR 同时能够比对多个扩增子，联合应用 RT-PCR 技术还可达到定量的目的。不

1、蛋白样品不能反复冻融； 2、蛋白样品应加蛋白酶抑制剂，以增加蛋白的稳定性（建议最好能多加几中种蛋白酶抑制剂）； 3、细胞水平要做Western Blot，一般地5×106个细胞提取的蛋白够就足Western Blot； 4、如果目标蛋白是膜蛋白和胞浆蛋白，所用的去垢剂就要温和得多，建议提取后最好加上NaF去抑制磷酸化酶的活性； 5、若转膜不完全，可以加大上样量，还有转移时你可以用降低电流延长时间，转膜液中甲醇的比例多加5－10％； 6、如果上样量超载，

提到标准品和对照品，也许还有很多小伙伴并没有真正了解两者的含义和区别，更不能在工作中将两者良好的运用，今天小析姐就汇总了我们工作常见的但是又存在误区的词，这就一定不能漏掉标准品和对照品了，快来看看吧。 1、标准品 对照品与标准品是2个不同的概念，中国药典凡例中已有明确的定义： 对照品系指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质，而标准品系指用于生物检定、抗生素或生物药品中含量或效价测定的标准

复方氨林巴比妥注射液是由氨基比林、安替比林和巴比妥组成的复方制剂，其退热作用是通过抑制下视丘前列腺素的合成和释放，恢复体温调节中枢感受神经元的正常反应性而实现的，同时它还能通过抑制前列腺素等致热原的合成而起到镇痛作用。 复方氨林巴比妥的用法用量怎么定？使用时需注意啥？今天界小药就和大家来探讨一下。 说明书中的用法用量 复方氨林巴比妥（点击获取完整用药信息）主要用于急性高热时的紧急退热，对发热时的头痛症

Western blot的洗液TBST是实验室常用的配制液体，对于TBST的配方也基本上相差不多，其中配方中就有一种组分是Tween-20，一种黄色或琥珀色澄明的油状液体，具有特殊的臭气和微弱苦味。用移液枪吸取时会有一种滞后感。为什么在Western blot的洗液TBST中要加入这么一种试剂，Tween-20在Western blot 中在发挥什么样的作用呢？ 首先了解一下什么是Tween-20。Tween-20也写作Tween 20，也称Polyethylene glycol sorbitan monolaurate，中文名为吐温-20或吐温20。Tween-20为黄色或琥珀色澄

分子克隆（基因克隆/DNA重组/载体构建）技术是一种在分子水平上操作的技术，用于将特定的DNA片段从供体生物中分离出来，然后通过体外重组、转化和转导等方法，将其插入到适合的克隆载体中，并将重组克隆载体引入到合适的寄主体内进行复制与扩增。可以应用于蛋白表达、病毒包装、基因治疗、细胞治疗、mRNA疫苗、RNA干扰、细胞功能等研究。 具体操作流程：一、聚合酶链式反应（PCR）DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA来启动合成，

线粒体基 因组组装结果有很多缺失，还都是在关键的蛋白质编码基因上，怎么组装都组装不出来，该怎么解决啊

除了常规体检项目外，各个年龄段的女性应重点筛查哪些疾病？ 近年来，女性健康问题越来越突出，尤其乳腺癌、宫颈癌等疾病高发。有数据显示，我国乳腺癌发病率自90年代以来增长速度是全球的两倍多；而每年约有10万宫颈癌新发病例，占世界总数的1/5。 定期体检是发现疾病的最好手段，能有力地为女性健康“保驾护航”。在女性不同的年龄阶段，特定疾病的危险性也有所不同。因此，除了常规体检项目外，各个年龄段的女性应重点筛查哪些疾病

京津冀有一家实验室，MDL实验中心 ，位于北京大兴机场附近的固安肽谷生物医药产业园区，占地面积有6000平，拥有SPF级动物房，生物安全P2级实验室，万级层流手术室，可以做动物实验 细胞实验 病理实验 蛋白实验 分子实验 快速检测等，实验室可以参观考察，参与实验也是提供住宿的

D-手性肌醇CAS：643-12-9 5，6-二羟基吲哚CAS：3131-52-0 聚二羟基吲哚CAS号8049-97-6 紫外线吸收剂BP-6 CAS：131-54-4 2-巯基噻唑啉CAS：96-53-7 多库脂钠CAS：577-11-7 石胆酸CAS：434-13-9 植物醇CAS：150-86-7 维生素D3 CAS：67-97-0 3-氨基丙酸甲酯盐酸盐CAS：3196-73-4 5-甲基吩嗪硫酸甲酯 (PMS)CAS：299-11-6 DAPI荧光染料 蓝色DAPI双链CAS：28718-90-3 双酚FCAS：620-92-8 苯基周位酸CAS：82-76-8 四乙酰核糖CAS：13035-61-5 2-甲基-5-硝基咪唑CAS：88054-22-2 O-甲基异脲硫酸盐CAS：52328-05-9

PCR扩增主要包括以下几个组分：1）引物；2）酶；3）dNTP；4）Buffer；5）cDNA或DNA。注：现今大部分PCR酶试剂盒一般都是酶，dNTP和Buffer的预混液。 因此，需要从引物，酶，cDNA和DNA模板下手，进行分析。 第一步，一定要确定的是—cDNA。 每个基因在不同组织，不同时期中表达量是不同的。首先要确定你的基因在哪个组织，哪个时期表达最高，确认之后就选这些组织和时期，否则很难做出来。 问题：怎么查找目的基因在哪个组织和时期中表达高？ 答：1）

前置知识 引物是一种短的DNA或RNA序列，用于在PCR（聚合酶链式反应）和其他分子生物学技术中扩增和检测特定的DNA或RNA序列。 引物通过与目标序列的互补碱基配对来定向扩增所需的DNA或RNA片段。在分子生物学研究中，引物的设计是非常重要的一步，因为它直接影响到PCR扩增的特异性和灵敏度。 一、普通PCR与荧光定量PCR引物设计上的相同注意点 1.序列的查找是一致的，在NCBI上搜索不同物种的同一基因，序列选取应在基因的保守区段，选择合适片段长

随着我国老龄化社会的形成，心脑血管疾患逐渐成为严重影响人们生命健康的最主要疾病。心肌缺血将导致心肌细胞不可逆性坏死，被称为心肌梗死。作为终末分化细胞，大面积心肌细胞梗死将导致严重心脏功能不全危及患者生命及时恢复缺血心肌组织的血液灌注一“再灌注”是治疗急性心肌梗死唯一有效的方法。然而，当缺血心肌再次获得血液灌注后将导致比同时间单纯缺血更加严重的心肌损害，这一矛盾的现象被称为再灌注损伤。心肌缺血再灌注

动物模型合集 | 真菌性角膜炎 前言 真菌性角膜炎（fungal keratitis，FK）是一种高致盲率的感染性角膜病，严重者甚至丧失眼球。我国是个农业大国，真菌性角膜炎的发病率长期居高不下，近十年来，真菌性角膜炎的发病率在我国明显升高，主要与广泛应用广谱抗菌素及皮质类固醇激素，或长期配戴角膜接触镜和免疫抑制剂的使用有关。但是由于目前致病真菌繁多、病因复杂，对角膜真菌感染的发病机制的基础研究很局限，没有肯定结论，而且临床上缺

一、概念 细胞传代：在细胞培养过程中，去除原培养基并将细胞从原培养体系转移到新鲜的培养基中，维持细胞的活力与增殖。细胞传代既可以扩大细胞培养量，也能够避免细胞因进入平台期而出现生长抑制甚至死亡的情况。 二、实验步骤 1. 贴壁细胞的传代: 1) 倒置显微镜下观察细胞形态及密度，评估细胞的状态，以作为传代比例的参考。 2) 提前紫外杀菌（至少30min为宜）操作台及实验材料。 3) 注意无菌操作，在操作台中吸除或倒掉培养皿内旧培养

大小实验，日出日落又一天

忙忙碌碌又一天

1. 贴壁细胞如何进行传代? 去掉原T25培养瓶里面的培养基，T25瓶加3-4 ml PBS洗1-2次;弃PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA (1X)消化液消化细胞，显微镜下观察，待细胞变圆，细胞间隙明显，部分细胞刚开始脱离瓶壁，加4 ml左右完全培养液混匀终止消化，将细胞小心吹打下来，1000 rpm/min室温离心5min;弃上清，细胞沉淀用完全培养液重悬，按要求分瓶(视细胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8)，每T25瓶补足培养基至5-6 ml，37℃、5%CO2孵箱培养。 2. 悬浮性细胞应如何传代处理?

细胞迁移(Cell migration)：因其类似体外伤口愈合过程，又名伤口愈合实验(Wound healing assay)，是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。可用于可以观察药物、基因等外源因素对细胞迁移、修复和相互作用的影响。 基本原理：在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕/伤口”，划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕/伤口”愈合，于细胞迁移过程中在开始和定期捕获图像，通过测量不同时间点的划痕间距并

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