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管轶等人最新证据:走私的穿山甲携带冠状病毒,与2019-nC
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管轶等人最新证据:走私的穿山甲携带冠状病毒,与2019-nCoV高度相似
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研究样本来源
第一**本是广西海关在2017年8月至2018年1月期间的反走私行动中获得,总共有包括肺、肠和血液等多种器官的43个冰冻组织,来自18只穿山甲。
针对它们进行RNA高通量测序显示,有6个存在冠状病毒:2个在肺,2个在肠,1个是肺-肠混合物中,1个是血液中。
如下图所示,使用肠-肺混合样本,能够使用Vero-E6细胞系分离出一种新的乙型冠状病毒属 (Betacoronavirus)。
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测序之后,研究人员获得了6个完整基因组序列GX/P1E、GX/P2V、GX/P3B、GX/P4L、GX/P5E、GX/P5L,它们均属于2019-nCoV谱系。而且,这些从冷冻穿山甲样本上找到的冠状病毒和2019-nCoV病毒有类似的基因组结构。
有基因组序列之后,研究人员设计了用于qPCR检测(核酸检测的核心方法)的引物,可以检测一个样本中是否含有这批冷冻穿山甲的同款冠状病毒。
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第二**本是在2018年5月至7月期间收集,是12只穿山甲的19个样本(9个肠组织,10个肺组织),经过qPCR检测后,他们发现3个肺组织样本呈阳性。
也就是说,第二批穿山甲,和第一批穿山甲的冠状病毒是一样的。
第三**本是在新冠病毒爆发后,广东重新检查了在2019年3月的反走私行动中获得的5个归档穿山甲样本,包含2个皮肤拭子,1个不明组织,1个鳞片。
通过高通量测序,可以发现鳞片样本中含有冠状病毒的读数,从这些数据中能够组装一个21505 bp的部分基因组序列,约占新冠病毒基因组的72% 。
值得注意的是,2019年在广东进行的另一项关于患病穿山甲的研究,也在肺部样本中发现了与新冠病毒相似的病毒群。
研究方法与结论
基于这些发现,研究团队采用不同的组装方法和人工处理,生成了占全长病毒基因组86.3% 的部分基因组序列。
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