生物学实验技术总结～ 实验轻轻松松，允许白嫖 #分子生物实验##医学科研##分子生物学#

pcr引物长为什么延伸温度会升高？ 搜索了很多答案都在说引物过长会使延伸温度超过74度，偏离耐热DNA聚合酶的最适温度，但是都没有说为什么引物长延伸所需要的温度高？在复性的时候引物已经与模板链配对了，接下来延伸的时候是聚合酶连接脱氧核苷酸，给到聚合酶合适的温度就好，这里的温度跟引物的长短有什么关系？这是第一个问题 第二个问题，为什么引物中GC对多，不利于延伸？我的想法还是引物无论怎么样，复性时与模板链已经配好对了

硫代巴比妥法测定植物mda含量时，粗提的酶液经过硫代巴比妥反应后的待测液可以在什么环境下保存多久？

有没有大神帮忙看看

PCR和凝胶电泳实验结果常见问题及原因分析 为了排除某些因素对PCR结果的影响，PCR实验需要对照实验。PCR的阳性对照是Marker，推测PCR产物长度，判断PCR产物是否是目的片段。PCR的阴性对照是PCR的空白管，除了模板不加之外，其成分与其他管一样，证明没有其他模板污染。 由于目前所用的PCR仪器自动化程度较低，操作步骤较为繁杂，人为因素大，这就不可避免地会出现不同程度的误差。轻微的污染、加量的误差等均可导致结果较大的差异，甚至阳性和

最近俩月做水稻的基因同源重组无论咋样都连不上大小800-2000bp的都有，kod酶扩目的片段再去连接也不好使求教该怎么办才能连上谢谢！

幼鼠神经元细胞提取 实验室材料的准备：75％的酒精、尖头镊子、小剪刀、神经元细胞培养液、灭菌的EP管若干只。新生小鼠酒精消毒五分钟，进行解剖背部神经节取材，用眼科剪小心剪开背部皮肤，这样可以游离出幼鼠背部的关节，小心剥离肌肉，把取下的神经节放入加有双抗的pbs中。冲洗完成后离心五分钟，弃去上清液，加胰酶消化三十分钟，加完全培养基终止消化。然后就是离心、过滤、养细胞这些过程了。

简介： 两个大分子间的共价结合,比如抗体与酶或者酶与DNA,是研究人员一项重要的任务。有几种方法可用于交联两种生物大分子。常用的一种方法是使用小型交连剂(如磺化-SMCC)。SMCC的一端有一个胺反应性NHS酯基团,可与蛋白质上的自由胺(-NH2)发生反应;另一端有一个硫基反应性的马来酰基团,可与待连接生物大分子上的硫基(-SH)发生反应。由于蛋白质通常包含自由胺和硫基两种官能团,SMCC修饰的连接剂极不稳定且容易自反应,导致大量同型交联反应。此外,

分子生物学：PCR检测技术操作步骤 聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR)是利用一段DNA为模板，在DNA聚合酶和核苷酸底物共同参与下，将该段DNA扩增至足够数量，以便进行结构和功能分析。PCR检测方法在临床上快速诊断细菌性传染病等方面具有极为重要的意义。 PCR为最常用的分子生物学技术之一。至今在世界范围内都有广泛的应用，作为生物学实验的一个重要的方法，其有着不可估量的作用。 简单来说分为以下三个步骤： ✦ DNA变性，加热使靶DNA

动物行为学 | 旷场实验 旷场实验(Open field test, OFT)又称敞箱实验，是一种评价啮齿类实验动物自主运动行为、探究行为与紧张度的一种方法，现己经广泛应用于帕金森病、抑郁症、焦虑症等神经、精神疾病以及中枢药物评筛的研究中，通过旷场实验观察实验动物的焦虑水平，其中，水平活动、中央格停留时间、梳毛次数反映动物的焦虑情况，垂直活动反映动物对周围环境的不确定性和对周围环境中可能存在的危险性的观察。 实验动物： 大鼠或小鼠。

有没有分子生物学的电子档呀

5分钟学会如何设计PCR引物 查找目的基因序列并不能直接用于我们研究所用，因为查找到的基因序列只能算是基因的电子序列，并不是我们研究要用的现实中的序列，如何获得现实的基因序列呢？这就需要我们根据基因的电子序列来设计引物了，通过引物借助PCR方法才能获得我们的目的基因序列。接下来，我们将介绍一下PCR方法并讲述如何设计引物。 PCR（polymerasechainreaction），即聚合酶链反应，又称基因体外扩增技术，是由一对引物介导、能在体外对

常见的BCA法检测蛋白定量 在蛋白质比色定量试验中，最常用的方法是二喹啉甲酸（Bicinchoninic acid，BCA）法蛋白定量。那么为什么我们要选择用BCA法？BCA法是Lowry测定法的一种改进方法，与Lowery法相比，BCA蛋白测定方法操作更简单，试剂及其形成的颜色复合物稳定性更好，几乎没有干扰物质的影响，灵敏度高（微量检测可达到0.5μg/ml），应用更加灵活。与Bradford法相比，BCA法的显著优点是不受去垢剂的影响。 BCA法蛋白定量的原理是什么？ 大多数蛋白样

UV的操作流程及校准指南（建议收藏） 紫外分光光度法是根据物质的吸收光谱，来研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。紫外分光光度计可以在紫外可见光区任意选择不同波长的光。紫外分光光度计的使用及校准需要注意哪些问题呢？跟小析姐一起来看看吧、 物质的吸收光谱就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。 由于各种物质具有各自不同的分子、

想问下我在做DNA聚丙烯酰胺电泳实验，成像时只有DNAmarker有痕迹，其他样品没有，这是为什么？

干货分享 | 基因表达调控，如何选择？上调？敲降？ 在基因功能研究中常用两种基础策略，功能减弱或缺失，功能增强或获得。 实现基因功能减弱，可以采用RNA干扰（RNAi）技术下调目的基因表达。在RNAi使用中，siRNA或shRNA的设计是关键。长度约为21bp的siRNA与蛋白形成RISC复合物，结合目的基因的mRNA，从而使其降解，达到降低基因表达水平的目的（注意RNAi是作用于mRNA水平）。但需要引起注意的是，如果目的基因在细胞中本体表达就较低的情况下（一般

实验干货 | 结核分枝杆菌感染实验室检查 结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）是经典致病菌，引起肺结核和肺外感染。结核病是目前全球感染性疾病死亡的主要原因。 结核分枝杆菌复合群（Mycobacterium tuberculosis complex，MTBC） 该菌是细长、直或稍弯曲、两端圆钝的杆菌，长约1~4 μm，宽约0.3~0.6 μm，抗酸染色阳性，可致结核病。结核分枝杆菌复合群包括MTB、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌、卡内蒂分枝杆菌和田鼠分枝杆菌等。非结核分枝杆菌（non-tubercu

内参即是内部参照（Internal Control），对于哺乳动物细胞来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白（Housekeeping Proteins），它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。 一为什么要使用内参呢？ Western blot除了能证明某样品含有某种蛋白之外，其最为重要的作用是比较不同条件下或者不同组织中，目的蛋白表达量的相对多少。即为蛋白表达水平最直接的证据。要衡量蛋白的表达水平，前提条件就是等量的上样量

96孔板加药检测细胞增殖，2500个每孔，作用48小时，10%CCK8测OD值，结果与空白相比OD值明显增长，但目镜下细胞几乎没变化

一、简介 PAS（Periodic Acid-Schiff stain）染色又称过碘酸雪夫染色，糖原染色。一般用来显示糖元和其它多糖物质，还可以观察肾小球基底膜、结肠杯状细胞中性黏液物质、阿米巴滋养体和霉菌的着色。其原理是过碘酸能使细胞内的多糖乙二醇基氧化成二醛，再与Schiff氏液的无色品红结合，红色，定位于胞浆上。 二、染色流程 1. 切片常规脱蜡至水； 2. 蒸馏水洗1-2min； 3. 高碘酸溶液氧化10min； 4. 蒸馏水洗，甩去多余水分； 5. 雪夫（schiff）试剂染色10-15min

相当多的蛋白质行使功能的时候并不是单打独斗的，蛋白质们通过蛋白质相互作用形成复合体然后进行工作。因此，研究蛋白质的相互作用成为研究蛋白质功能和作用机制的最为重要的环节之一。 研究蛋白互作的方法有很多，今天小编就几种常用的方法做个简单的概述，希望能够帮助到大家。 1、酵母双杂交系统 原理：很多真核生物的位点特异转录激活因子通常具有两个可分割开的结构域，即DNA特异结合域（DNA-binding domain, BD）与转录激活域（Transcript

家人们，我想问一下分子对接的时候从哪里看对接分数，或者还有什么方法判断靶点与化合物最优对接结果吗

很多用户不知道DNA提取的正常浓度，也从来不跑电泳，不知道测量浓度对应的真实电泳浓度（亮度）有关系，平时其他品牌的试剂盒，提出几百纳克往往含有大量的杂质或者残留的RNA导致的虚高浓度。而自己却不知道。所以就会误以为DNA的正常浓度应该是几百纳克，以为几十纳克就是低了不正常的浓度，这是错误的。不跑电泳多以不知道20纳克，甚至5纳克的纯的DNA都足够跑出很亮的DNA条带。

2016年Aidlab官方正式发布新闻： 世界首家效果满意的骨组织RNA提取试剂盒研发成功，完美解决世界难题！ 随着2017年2月本发明专利内容的公开，国内外各个品牌厂家开始陆续发布骨组织RNA快速提取试剂盒。 2019年Aidlab开始陆续收集到部分客户使用本骨组织RNA提取试剂盒的文献，从此再难啃的“硬骨头”RNA的提取在Aidlab面前不再是难以跨越的高山！

机器真的可以直接测量核酸的真实纯度和浓度吗？ 你还在以为不跑电泳，机器测量od值换算的浓度就一定是真实的核酸浓度吗？你还在以为测量od比值就能知道核酸的全面真实纯度吗？大错特错了，不要再为这个错误概念损失惨重了。 让我们一起来看看这个质粒提取后-琼脂糖凝胶电泳结果分析实验的对比 从结果分析：从抽提的质粒浓度上来看，T公司试剂盒提取的质粒浓度要普遍高于Aidlab的试剂盒。但在质粒跑胶的亮度对比上，两者抽提的质粒跑胶亮

一.百萤 链霉亲和素-Xtra IF488缀合物概述 链霉亲和素缀合物广泛用于和生物素缀合物结合以检测多种生物靶标，例如蛋白质，核酸和其他分子。它们被用作许多生物检测的理想选择，例如免疫荧光显微镜，流式细胞术，蛋白质印迹和其他生物应用，因为链霉亲和素具有很强的亲和力结合生物素，在广泛的pH和温度范围内都不会受到影响。AAT Bioquest®提供多种标记有经典荧光染料的链霉亲和素偶联物（例如：FITC，TRITC，TexasRed®，Cy3®，Cy5®和Cy7®），以及

ncbi现在下不了gff格式的文件，我应该怎么操作才能获得gff格式的文件啊，帮帮忙吧大佬挺急的，我想回家过年呜呜呜呜

请问用碱裂解法提取的质粒老是在500bp左右有一条质粒掉带，或10k以上有基因组，是否是裂解的时候没有要好或裂解时间问题？谢谢各位大佬

AAT Bioquest提供多种链霉抗生物素蛋白产品，包括使用我们出色的iFluor 和mFluor 染料系列标记的产品。iFluor 和mFluor 染料都经过优化，可用于标记蛋白质，特别是抗体。这些染料是明亮的，光稳定的并且对蛋白质具有小的猝灭。荧光仪器的主要激光线（例如，350,405,488,555和633nm）可以很好地激发它们。iFluor 染料还具有比经典荧光标记染料（如FITC，TRITC，TexasRed®，Cy3®，Cy5®和Cy7®）更好的标记性能。每种iFluor 染料的开发都与特定AlexaFluor®或其他等效荧光标

有会基因家族分析的大佬可以教我吗，有偿

一、百萤 羟芪巴脒*DNA和RNA染料*简介 羟芪巴脒（也称为Fluoro Gold）用于染色DNA和RNA。与RNA相比，当与DNA结合时，它表现出明显不同的荧光发射谱。该阳离子染料也经常用作逆行神经元示踪剂。 图1.羟芪巴脒*DNA和RNA染料*的化学结构 二、百萤 羟芪巴脒*DNA和RNA染料*参数 Ex(nm) 358 Em(nm) 433 分子量 472.54 溶 剂 Water 存储条件 在-15℃以下保存，避光防潮 CAS 223769-64-0 外观 黄色粉末 三、百萤 羟芪巴脒*DNA和RNA染料*实验方案 染色细胞示例 羟芪巴脒的使用与其他荧

是能帮我分析分析吗？拜托拜托#PCR#琼脂糖凝胶电泳#分子生物学#

高灵敏度荧光的DNA定量试剂盒针对CytoCite和Qubit荧光分析仪进行了优化。DNA定量是用于各种基因组分析的DNA样品制备中非常重要的。 这种Portelite dsDNA定量试剂盒提供了一种使用手持式荧光分析仪使用Helixyte Green探针定量dsDNA的快速方法。 它针对Cytocite 和Qubit 荧光计进行了优化。 Portelite dsDNA定量分析线性超过五个数量级。 该测定法对RNA上的双链DNA（dsDNA）具有高度选择性，并且设计为对于25pg / uL至100ng / uL的初始样品浓度是准确的。 Helixyte Green在与dsDNA结

细胞活性通常与细胞健康以及细胞群成功存活并正常运作的能力相对应。细胞活性的检测可用于使细胞行为与种群中的存活细胞数量相关，优化培养物中维持的细胞种群的生长条件，测试毒理学或评估潜在候选药物的功效。定义细胞存活力的参数可以是多种多样的，范围从细胞膜的完整性或细胞内酶的活性到线立体的膜电位或细胞群的氧化还原电位。 我们的细胞活性检测试剂和检测方法旨在检测细胞活性的不同特征，并使用酶标仪，荧光显微镜或流

我研究的课题方向是目的基因在乳酸菌中的表达，之前一直用质粒pMG36e做实验，但一年下来，总是状况百出，先是空载体提不出来，折腾了两三个月。后来连接了目的基因以后转化到TOP10总是挑不到阳性菌落，转化DH5α又会出现抗生素失效般的效果，根本没有单菌落，这个过程又折腾了好长时间。老板怀疑我们的质粒有问题（因为做pMG36e构建的好多人已经发了文章了，说明这个质粒是可以做得出来的），所以想求助各位虫友，是否有这个质粒，能不能

这学期刚学分子，稍微顺了一下原核生物dna复制过程，不知道有没有错误或者少了什么，感觉终止那里很潦草，书上也没有过多阐述。请各位老师指点

麦胚凝集素（WGA）是一种与N-乙酰-D-葡萄糖胺和唾液酸结合的凝集素。WGA与糖缀合物结合，其衍生物和缀合物被广泛用于标记细胞膜和纤维化瘢痕组织，用于荧光成像和分析。 图1.将活的Hela细胞用小麦胚芽凝集素AF488以5µg/mL标记30分钟，然后用Hoechst33342染色。用荧光显微镜采集图像，使用FITC和DAPI滤波片组。 1.小麦胚芽凝集素(WGA) AF488标记参数 Ex(nm) 490 Em(nm) 520 分 子 量 N/A 溶 剂 Water 存储条件 在-15℃以下保存，尽量避免光照 2.小麦胚芽凝集素(WGA) AF488标

麦胚凝集素（WGA）是一种与N-乙酰-D-葡萄糖胺和唾液酸结合的凝集素。WGA与糖缀合物结合，其衍生物和缀合物被广泛用于标记细胞膜和纤维化瘢痕组织，用于荧光成像和分析。 图1.将活的Hela细胞用小麦胚芽凝集素AF488以5µg/mL标记30分钟，然后用Hoechst33342染色。用荧光显微镜采集图像，使用FITC和DAPI滤波片组。 1.小麦胚芽凝集素(WGA) AF488标记参数 Ex(nm) 490 Em(nm) 520 分 子 量 N/A 溶 剂 Water 存储条件 在-15℃以下保存，尽量避免光照 2.小麦胚芽凝集素(WGA) AF488标

或者熟悉单碱基测序引物设计的大神，原始引物设计出来后加尾的规则究竟是什么

根据乳糖操纵子模型,阐述调节基因突变和操纵基因突变所能产生的突变体类型 一个论述题，救救孩子吧

核酸发生局部配对的意义，有什么优点？

概述 准备细胞 添加染料工作溶液 在37°C孵育30分钟 洗涤细胞 在荧光显微镜下分析 注：该方案仅提供指南，应根据您的具体需求进行修改。 操作方法 1.制备溶酶体染色溶液： 1.1解冻 LysoBrite 染料至室温。 1.2通过将20μL的500 X LysoBrite 染料稀释到10 mL Hanks和20 mm Hepes缓冲液或缓冲液（HBSS）中，制备染料工作溶液。 注1：对于一个96孔板，20μL的LysoBrite 染料就足够了。 在<-15℃下等分并储存未使用的LysoBrite 染料储备溶液。 保护它免受光照，避免反复冻融

1.百萤 LysoBrite溶酶体近红外荧光探针简介 LysoBrite 溶酶体近红外荧光探针，用于标记活细胞的溶酶体。专有的溶解性染料可能通过溶酶体pH梯度选择性地积聚在溶酶体中。 溶质指示剂是疏水性化合物，易于渗透完整的活细胞，并在进入细胞后被捕获在溶酶体中。 进入溶酶体后，LysoBrite 试剂的荧光明显增强。 可以使用荧光成像，高含量成像，酶标仪荧光测定法或流式细胞术检测荧光。 LysoBrite 橙色，红色，深红色和NIR试剂具有极高的光稳定性和优异的

问：ATTO染料有哪些特点？ 答：ATTO染料是一种高性能的荧光染料，具有以下特点： 1. 高荧光量子产率：ATTO染料的荧光量子产率一般在0.8-0.95之间，表明它们可以有效地将吸收的光能转化为荧光发射。 2. 高稳定性：ATTO染料具有很好的光稳定性和化学稳定性，可以耐受高强度的激光照射和极端的pH值。 3. 高亲水性：ATTO染料具有较低的亲脂性和较高的亲水性，可以减少在水溶液中的聚集和非特异性结合，提高荧光信号的清晰度和灵敏度。 4. 广泛的光谱选