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维斯塔脱恐实用指南:hiv检测指南和攻略!

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相信科学检测,科学进行检测!
当发生了高危行为,我们最害怕的就是感染上了艾滋病,而这种恐惧是我们慢慢产生了恐艾症。之所以得上恐艾症,是因为一些恐艾者对艾滋病相关知识了解的比较少,或者一知半解断章取义,片面的理解艾滋病相关知识。另外社会上有些舆论的误导,一些对艾滋病的不恰当的形容,给人们造成了沉重的心理压力。一些高危人士过度恐惧的心理,个性以及不健康的心态也会导致人患上恐艾症。解决恐艾问题,艾滋病检测变得非常必要。做艾滋病检测不仅是对自身健康的尊重,更是对亲友的健康甚至生命的负责。
本内容由上海维斯塔整理完成,旨在帮助大家结果如下问题:
1、 什么行为需要检测
2、 怎么进行检测
3、 如何对待检测结果
所述内容均采集相关资料整理完成,希望能给大家带来帮助,同时也请各位志愿者给予指正。



1楼2012-04-19 16:07回复


    2楼2012-04-19 16:10
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      一、哪些行为需要检测
      1、MSM

      2、吸毒人员

      


      3楼2012-04-19 16:29
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        3、XJ

        4.

        


        4楼2012-04-19 16:31
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          5、需要检测行为总表



          5楼2012-04-19 16:40
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            二、检测方法选择
            1、HIV感染生活史
            HIV与人体细胞表面受体结合后, 病毒核心蛋白和两条 RNA进入人体细胞,病毒RNA在细胞质内生成反转录酶,反转录酶以病毒RNA为模板合成单链 DNA,随后由 DNA聚合酶合成双链 DNA(原病毒)并整合到人体细胞染色体上.细胞 DNA产生新病毒蛋白质(抗原)和新 RNA.新病毒蛋白质和新 RNA生成新病毒进一步感染其他人体细胞.同时病毒核酸随细胞的分裂可以传至子代细胞,随着病毒蛋白质(抗原)的增多,人体的免疫细胞逐渐产生抗体,抗体能杀灭抗原但无法消灭整合在细胞染色体上的DNA,所以无法完全消灭HIV.
            感染HⅣ后图示:

            相关物质出现的时间早晚如下:
            HIV RNA HIV DNA(原病毒) HIV RNA 和病毒蛋白质(抗原) 抗体
            


            6楼2012-04-19 16:43
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              三、HIV感染的主要检测方法
              目前检测HIV的方法有100多种,总体来说可以分为抗体检测和病毒检测两大类。病毒检测包括细胞培养(病毒分离)、p24抗原检测和病毒核酸检测。早期对HIV的诊断主要是通过血清学试验检测抗HIV的抗体,间接地诊断HIV感染。近几年,分子生物学方法不断被应用到HIV的检测中,HIV的实验室诊断方法取得了很大的进展,核酸检测已经成为了HIV实验室诊断的发展方向。
              抗体通常是在感染后3~8周能够被检测出来。目前,大多应用双抗原夹心法,这种方法具有很好的灵敏性和特异性。抗体检测由初筛和确认试验组成,初筛试验呈阳性的必须进行确认试验。酶联免疫吸附分析(ELISA)方法有一定的灵敏度,且操作简单、快速,适合对大量样品的检测。因此,是目前临床通用的初筛检测方法。国际上有3种确认试验方法,包括免疫印迹试验、条带免疫试验及免疫荧光试验,目前以免疫印迹试验最为常用。
              在窗口期,病毒抗体不能被检出,但可以检测到病毒相关抗原或分离病毒。抗原能够在个体感染后先于血清转化2~18 d被检测到。因此,在血清转化期通过检测p24抗原有着很大的优势,可以作为早期辅助诊断HIV感染的一种方法。
              病毒培养是检测HIV感染最精确的方法。一般采取培养外周血单个核细胞(PBMC)的方法进行HIV的诊断。
              病毒核酸检测通常是通过检测HIV RNA水平来反映病毒载量,具有很高的灵敏度,使用适时荧光聚合酶链反应(PCR)技术,能够在HIV感染的前2周检测到病毒核酸。病毒核酸检测方法可用于HIV的早期诊断,如窗口期辅助诊断、病程监控、指导治疗方案及疗效测定、预测疾病进程等。目前常用的测定方法有逆转录PCR实验(RT PCR)、核酸序列扩增实验(NASBA)、分支DNA杂交实验(bDNA)等。使用高灵敏度的适时荧光PCR技术,能够在HIV感染的前2周检测到病毒核酸。


              8楼2012-04-19 17:39
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                HIV抗体、抗原检测
                HIV抗体一般在人感染后几周逐渐出现,可延续至终生,血清学试验分为初筛和确认试验。最常用的初筛试验和确认试验分别是酶联免疫吸附试验和免疫印迹试验(WB)。常规实验方法:酶联免疫吸附试验、免疫印迹试验(WestBlot)、间接免疫荧光法(IFA)。快速检测方法:明胶颗粒凝集试验、斑点免疫结合试验、P24抗原的检测、分子生物学方法、RT PCR检测法、荧光实时PCR检测技术、支链DNA(bDNA)、连接酶酶促链式反应(LCR)、核酸序列依赖性扩增(NASBA)、转录介导的扩增(TMA)
                1、 酶联免疫吸附试验
                ELISA法的基本原理是免疫反应物通过化学或免疫学的方法形成酶结合物,酶结合物能与待检样品中相应的抗原或抗体结合成为免疫复合物,然后加入酶底物,经酶的催化或水解作用,无色底物产生颜色,用肉眼、分光光度计观察结果。初筛用的HIV ELISA试剂目前已经发展到第四代检测试剂。第一代试剂主要以病毒裂解物或部分纯化的病毒抗原包被反应板,以检测血清中的抗体。由于包被的抗原不很纯,假阳性率较高。第二代试剂使用基因工程方法得到的重组抗原和合成肽包被反应板,由于纯化抗原的使用,特异性有了很大提高。第三代试剂使用双抗原夹心法检测抗体,进一步提高了敏感性。第四代试剂则在第三代的基础上进一步增加了P24抗原的检测,把HIV抗原和抗P24的抗体同时包被反应板,可同时检测血清中的HIV抗体和P24抗原。
                2 免疫印迹试验免疫印迹试验主要用于确认试验,基本原理是HIV全病毒抗原经过SDS PAGE电泳,将分子量大小不等的蛋白带分离开来,然后再把这些已经分离的不同蛋白带电转移到硝酸纤维素膜上。将此膜切割成条状,每一条硝酸纤维素膜上均含有经电泳分离过的HIV病毒抗原。将待检血清样品用稀释液稀释成1/100,再把它直接加到硝酸纤维素膜上,恒温震荡,使其充分接触反应,血清中若含有抗HIV抗体,就会与膜条上的抗原带相结合。加入抗人IgG酶结合 物和底物后,即可使有反应的抗原抗体结合带呈现紫褐色,根据出现条带情况判定结果。有报告说,免疫印迹试验的特异性不是很好,有大约2%的假阳性率,但免疫印迹试验依然是目前最常用的HIV确认试验。
                3 免疫荧光试验(IFA) 基本原理为应用H 9或HUT 78培养细胞作为载体,用HIV感染细胞,该细胞内就会含有HIV抗原,将HIV感染的淋巴细胞涂于玻片上,固定,制备为抗原片,加入待检血清,待检血清中的抗HIV抗体与抗原结合后,再与荧光素标记的抗人Ig结合,在荧光显微镜下可见到细胞内有黄绿色荧光。
                4 明胶颗粒凝集试验(PA) PA的基本过程是先将样品稀释,然后分别加入经抗原致敏的和未致敏的明胶颗粒,混匀后保温(一般为室温)。当血清中有HIV抗体存在时,经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原抗体反应,根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。PA操作简便,无需特殊仪器设备,适合对少量标本的检测。
                5 斑点印迹试验(或免疫层析/或渗滤) 斑点印迹试验一般采用硝酸纤维素膜作固相载体,用HIV抗原包被于固相载体,加入待测标本(可为血清、血浆、尿液和其他体液),一定温度反应后洗去未结合于固相载体上的标本,包被抗原和被检血清中抗体结合,用胶体金(或胶体硒)代替底物连接在葡萄球菌蛋白A上,金标记蛋白A具有与人Ig结合的能力,因而可与被捕获的HIV抗体结合。若样品中有HIV抗体,则薄膜上就会产生一桔红色斑点(或线条),一般3~10 min出结果,特异性较好,较为适宜于偏远地区临床用血检测,但不适于城市地区的献血员筛查。
                


                9楼2012-04-19 17:48
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                  分子生物学方法
                  随着生物技术的发展,核酸检测得到了人们越来越多的重视,它可直接检查HIV RNA,可在发现血清学变化之前检测HIV感染,而且比P24抗原检测方法更灵敏。
                  1 多聚酶链反应检测法 PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性—退火—延伸三个基本反应步骤构成。
                  ① 模板DNA的变性:模板DNA经加热至93 ℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备。 ② 模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55 ℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。
                  ③ 引物的延伸:DNA模板—引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成1条新的与模板DNA链互补的半保留复制链,重复循环变性—退火—延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成1个循环需2~4 min,2~3 h就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。检测HIV RNA,需要先利用逆转录反应将RNA转录为cDNA,继而以cDNA为模板进行PCR扩增即可,这样的反应称为RT-PCR。
                  2 实时荧光定量PCR技术实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
                  本技术的原理是使用荧光基团标记探针,5′端标记荧光基团R,3′端标记淬灭基团Q,在没有PCR扩增时,由于荧光基团和淬灭基团空间距离很近,使荧光基团被淬灭,不发荧光;而当PCR扩增时,引物与荧光标记的特异性探针同时结合在模板上,荧光标记的探针与模板的结合位置位于上下游引物之间,利用Taq酶 的5′3′外切酶活性,将荧光探针水解,荧光基团被释放出来,由于在空间上与淬灭基团分开,则发出荧光。发出的荧光可以被荧光探头检测到,一边扩增,一边检测,这样就实现了“实时”检测。该技术不仅实现了PCR从半定量到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性强、自动化程度高、有效解决了PCR污染问题等特点。
                  3 支链DNA检测法——bDNA bDNA是定量检测血浆中的HIV 1型RNA的一种方法。bDNA是指人工合成的带有侧链的DN**段,在其每个侧链上都可以标记被激发的标记物。将HIV的RNA通过离心从病毒颗粒中释放出来,然后用捕获探针1将其捕获到微孔中。捕获探针2与病毒RNA的另一部分特异结合,又与预放大探针结合。后者再与放大探针即bDNA探针杂交。两套靶探针分别与病毒RNA的pol基因的不同区域特异结合。在微孔中形成了HIVRNA寡核苷酸复合物。再加入1种化学发光底物孵育后可放大化学发光信号。通过发光强度来定量,因为发光强度与样品中HIVRNA含量成比例。bDNA不存在扩增物的交叉污染,这较PCR是一大进步。bDNA有数十个覆盖整个基因组的探针,可以方便地检测HIV某些变异株,但灵敏度不及PCR,提高bDNA灵敏度是一大难点。
                  4 核酸序列依赖性扩增法(nucleic acid sequence based amplification, NASBA) NASBA是由一对引物介导的、连续均一的、体外特异性核苷酸序列等温扩增RNA的新技术。反应在42 ℃进行,可在2 h内将RNA模板扩增约109倍。NASBA原理是提取病毒RNA,加入AMV逆转录酶、RNA酶H、T7RNA聚合酶和引物进行扩增。整个反应分非循环相和循环相:在非循环相中,引物I与模板RNA退火后在AMV逆转录酶的作用下合成cDNA,形成RNA:DNA杂合体,随即RNaseH降解RNA,引物Ⅱ与cDNA 退火,在反转录酶作用下合成第2条DNA互补链。双链DNA可在T7RNA聚合酶的作用下,经其启动子序列起动而转录RNA,RNA又可在反转录酶的作用下反转 录成DNA,进入循环相,对模板进行大量扩增。
                  5 转录介导的扩增技术(transcription mediated amplification, TMA)
                  TMA技术原理与NASBA基本一致,略有不同之处是TMA利用的是MMLV逆转录酶及T7 RNA聚合酶两种酶,MMLV逆转录酶既有逆转录酶的活性又具有RNA酶H活性。反应在 41.5 ℃进行,可在1 h内将RNA模板扩增约109倍。
                  6 连接酶酶促链式反应(LCR) LCR是基于靶分子依赖的寡核苷酸探针相互连接的一种探针扩增技术,是继PCR后新发展的一种较有前景的体外扩增技术。它的原理就是由2段寡核苷酸单链DNA探针与目标序列杂交,当该2段DNA探针与没有发生突变的模板褪火后,如果2探针是紧邻的,中间没有核苷酸间隔,则可在连接酶作用下连接起来,连接以后的新链又可以作为模板,引导下一周期的连接产生新的子链。若连接区段发生核苷酸的碱基突变,则连接反应不能发生,扩增反应终止。


                  10楼2012-04-19 17:48
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                    雅培四代就是抗原抗体一起测、硒标法那种,国内还没引进,据说国外很多在用的。
                    这东西网上资料真少,维斯塔有没有比较权威的资料发出来看看,谢谢


                    IP属地:福建11楼2012-04-19 17:49
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                      kj被动方无套有必要检测吗


                      IP属地:广东来自手机贴吧12楼2012-04-19 18:01
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                        有一篇论文你可以看看。PDF格式。
                        http://www.kinghawk828.com/pdf/History_Development_of_HIV_antibody_diagnostic_reagents.pdf
                        还有份资料供参考,未验证过其真实性。
                        HIV ELISA(酶联)诊断试剂的发展

                        ●第一代试剂
                        1985年3月,美国食品**监督管理局批准了第一个HIV抗体筛查试剂并将其应用于献血员的筛查,该试剂即为第一代HIV诊断试剂。第一代HIV诊断试剂原理为间接ELISA法,所用的包被抗原为体外培养的HIV裂解物,这种病毒裂解物中不仅含有很多杂抗原,而且所含的主要HIV结构和表达蛋白浓度不能保证,并且天然的结构和表达蛋白上含有很多交叉抗原表位,因而,灵敏度和特异性不高,出现许多假阴性和假阳性。尽管如此,第一代HIV诊断试剂的出现仍然是一个划时代的改变,其有效阻断了HIV通过血液的传播。
                        ●第二代试剂
                        随着基因工程技术迅速发展,1990年5月第二代使用基因重组或合成多肽抗原的HIV诊断试剂面试。虽然仍然是利用间接酶联免疫法原理,但第二代诊断试剂窗口期比第一代诊断试剂缩短了约20天,灵敏度和特异性也有所提高。同时由于第一代试剂只含有HIV-1抗原,而HIV-1抗原与HIV-2抗原的核苷酸序列相差40%,因此检测HIV-1抗体的试剂对HIV-2抗体阳性的标本灵敏度较低,常发生漏检,针对此种情况第二代诊断试剂中出现了HIV-1/HIV-2抗体诊断试剂盒,这种试剂盒在包被的抗原中又加入了HIV-2抗原(gp36多肽),使得在一次试验中可同时检测HIV-1和HIV-2抗体,既节约了时间和人力,又节约了成本。第二代试剂与第一代相比,特异性有明显的提高。
                        ●第三代试剂
                        1994年出现的第三代HIV诊断试剂一改过去间接法检测原理,利用双抗原夹心法检测标本中的抗体,酶标记物也由抗人lgG抗体(即第二抗体)改为特异性HIV抗原。此外,在非洲喀麦隆发现了HIV-1 O群后,研究者以HIV-1/HIV-2抗体试剂检测HIV-1 O群标本时发现常出现假阴性,因此又在试剂中加入HIV-1 O群抗原(gp41多肽)。因此第三代试剂灵敏度提高,窗口期进一步缩小,是国际上公认的较好检测抗体模式,也是目前国际和国内市场上的主流产品,常被视为金标准。目前我国国产第三代HIV诊断试剂盒在灵敏度、特异性方面已达到国际先进水平。
                        ●第四代试剂
                        第四代HIV诊断试剂是一种HIV-1/HIV-2抗体与HIV-1 O亚群抗体及p24抗原的联合检测方法。这种试剂省去p24抗体检测而增加了p24抗原检测,并不影响HIV抗体的检测。在对第四代试剂的研究中发现p24抗原滴度降低与血清阳转过程中未降低S/CO值,也没有发现第四代试剂检测阴性而第三代试剂检测为阳性的样本,所以未在p24抗原血症和血清抗体阳性转之间引入诊断的第2个窗口期。第四代由于可同时检测抗原和抗体,未完善的HIV感染的筛查试剂,因而,献血员筛查时,建议用第四代试剂进行检测,以尽量提高输血的安全性。
                        


                        13楼2012-04-19 18:32
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                          风险不是太高的
                          可以检测也可以不检测。
                          看你恐的情况吧


                          14楼2012-04-19 18:33
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                            请问这里的第四代有没有包括雅培四代硒标法,如果包括那18天雅培四代阴能排除多少


                            IP属地:福建15楼2012-04-19 18:55
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                              你 真** 牛逼


                              IP属地:四川16楼2012-04-19 19:17
                              回复