冷门基因抗体，只有组化对面抗体，用来泡wb跑不出条带来怎么办

01 蛋白酶抑制剂 蛋白酶抑制剂的作用是什么？ 蛋白质纯化、提取过程中常受到其本身存在的水解酶的影响。在提取蛋白质的过程中细胞破碎释放出蛋白酶，这些酶在与欲提取的蛋白质接触时，一旦条件适宜，就会发生反应，导致蛋白质分解。因此，在蛋白质提取过程中，需要加人蛋白酶抑制剂以防止蛋白质水解以保持蛋白质的完整性。 蛋白酶抑制剂的作用原理是什么？ 蛋白酶抑制剂（protease inhibitor）从广义上指与蛋白酶分子活性中心上的一些基团

一.细胞复苏 1、提前准备完全培养基并预热至37℃（可以放至在水浴或培养箱中进行预热，需要多少预热多少，反复预热会导致培养基失活）；用清洗洁净的烧杯或其他合适容器装有适量超纯水，然后放入37-38℃水浴锅中预热至37℃（至少需30min）；把所需耗材和其他物品放置于超净工作台中紫外照射灭菌； 2、提前查询所取冻存管的存放位置，把整个存储架子提起，为了降低复温对其它细胞的影响，可把该存储架子放置于装有液氮的泡沫盒中，快速（

流式细胞术广泛用于分析细胞表面和细胞内分子的表达、鉴定并确定异质细胞群中的不同细胞类型、评估分离亚群的纯度以及分析细胞大小和容积。 主要用于测定荧光标记的抗体检测蛋白产生的荧光强度，或结合了特定细胞分子的配体，如碘化丙啶与 DNA 的结合。 其染色过程包括从细胞培养物或组织样品制备单细胞悬液。然后将获得的细胞培养在包含未标记或荧光标记抗体的试管或多孔板中，再用流式细胞仪分析。 流式细胞仪主要有两型： 临床型（

流动相是影响液相色谱的关键因素。一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，但是如何配制。选择配制的方法不同，分析结果特别是保留时间，是会有显著差别的。高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，水性溶剂也常用于缓冲液。常因资料上表示的内容和实际的配制方法不同，而产生流动

培养细胞不贴壁 可能原因 1.胰蛋白酶消化过度； 2.支原体污染； 3.培养基pH值过碱（NaHCO3分解）； 4.细胞老化； 5.接种细胞起始浓度太低或太高。 解决方法 1.缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度； 2.分离培养物，检测支原体。清洁支架或培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物； 3.使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2； 4.启用新的保种细胞； 5.调节最佳接种细胞浓度。 悬浮细胞成簇 可能原因 1.培养液中含钙,镁离子； 2.支原体污染； 3.蛋白

脾细胞是ELISpot和FluoroSpot测定中使用最多的细胞，至少对小鼠和大鼠样本而言是如此。脾细胞可以很容易地从脾脏中分离出来，而不需要Ficoll分离。细胞可以在分离后直接使用，也可以冷冻保存，并在以后批量使用。 下面是编译自https://www.mabtech.com/knowledge-hub/isolation-freezing-and-tha的关于如何最好地（i）分离、（ii）冻存和（iii）复苏脾细胞的详细指南。 脾细胞的分离 材料 细胞过滤器，70µm尼龙，无菌 无菌剪刀和镊子或镊子 无菌培养皿 巴氏移液管，无

随着现代生物学研究的发展，微生物培养成为了重要的实验手段之一。然而，在进行微生物培养过程中，存在着许多污染因素，这些污染因素可能会对实验结果产生影响或者导致实验结果不准确。下面将介绍一些常见的微生物培养的污染因素以及相应的预防方法。 1、风速与风向 培养箱内的风速和风向对于保持温度的均一性以及避免污染都非常重要。一般来说，适当的风速和风向可以帮助培养箱内的温度保持均一，有利于微生物的正常生长。然而，当

细胞系和细胞株是细胞生物学中常用的两个概念，它们在研究细胞的生理、生化、遗传和分子生物学等方面起到了重要的作用。尽管两者相似，但实际上有明显的区别。 我们先来看看细胞系（cell line）的定义。细胞系是指从原始组织或细胞中通过培养和传代培养等方法获得的由同一种细胞组成的细胞群体。简单来说，细胞系是通过将原始细胞进行一系列培养和传代培养过程，使其能够持续增殖并具有某些特定的性质或表达某些特定的基因。 与细胞系

这是一个奇怪的问题，也是平时用的不多的问题，经常是离心3500rpm、5min或者1500rpm、5min或3000rpm、15min，但是有的文献显示需要离心力为400g（离心尿液），那么400g的离心力是不是等于1500rpm呢？今天就来说说这个问题，看看是不是您想要知道的答案。 PART01：什么是离心力？ ★在牛顿力学中，离心力是一种惯性力（也称为“虚拟力”或“伪力”），当在旋转的参照系中观察时，它看似作用于所有物体，它被指向远离平行于旋转轴并通过坐标系原点的轴。

巨噬细胞极化是指巨噬细胞在不同微环境刺激下改变其表型的过程。巨噬细胞通常极化为 M1 或 M2 两种表型，分别释放促炎或抗炎因子，发挥不同的功能。M1型巨噬细胞由 Th1细胞因子（TNF-α、IFN-γ）和细菌成分（脂多糖等）诱导，活化的 M1 巨噬细胞吞噬并破坏微生物，清除肿瘤细胞，并将抗原呈现给 T 细胞以引起适应性免疫反应。M2型巨噬细胞由 Th2细胞因子（IL-4、IL-13）诱导，主要发挥抗炎和组织修复的作用，参与伤口愈合、血管生成和纤维化等过程

细胞划痕(wound healing）法是简捷测定细胞迁移运动和修复能力的方法。 一、原理 在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上，用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线，去除中央部分的细胞，然后继续培养细胞至实验设定的时间，取出细胞培养板，在显微镜下观察并拍照记录特定位置细胞的生长迁移能力。 通过不同分组之间的细胞对于划痕区修复能力的不同，可以判断各组细胞的迁移与修复能力的差别。 二、步骤 1、准备： 所有能灭菌的器

在生物学和心理学领域，旷场实验作为一种常用的行为学测试方法，被广泛用于评估动物的情绪状态、探索行为以及焦虑水平。然而，尽管这一实验方法看似简单直观，其实在实际操作中却涉及诸多细节和注意事项。为了确保实验结果的准确性和可靠性，我们必须对旷场实验的各个环节进行严格控制。 旷场实验的设计和实施需要考虑动物的特性。动物的昼夜节律、性别差异以及先前的处理经验都可能对实验结果产生影响。因此在进行实验前，我们需

一、免疫荧光技术 免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。 用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法；用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法。这两种方法总称免疫荧光技

培养细胞不贴壁 可能原因 1.胰蛋白酶消化过度； 2.支原体污染； 3.培养基pH值过碱（NaHCO3分解）； 4.细胞老化； 5.接种细胞起始浓度太低或太高。 解决方法 1.缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度； 2.分离培养物，检测支原体。清洁支架或培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物； 3.使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2； 4.启用新的保种细胞； 5.调节最佳接种细胞浓度。 悬浮细胞成簇 可能原因 1.培养液中含钙,镁离子； 2.支原体污染； 3.蛋白

简介： 两个大分子间的共价结合,比如抗体与酶或者酶与DNA,是研究人员一项重要的任务。有几种方法可用于交联两种生物大分子。常用的一种方法是使用小型交连剂(如磺化-SMCC)。SMCC的一端有一个胺反应性NHS酯基团,可与蛋白质上的自由胺(-NH2)发生反应;另一端有一个硫基反应性的马来酰基团,可与待连接生物大分子上的硫基(-SH)发生反应。由于蛋白质通常包含自由胺和硫基两种官能团,SMCC修饰的连接剂极不稳定且容易自反应,导致大量同型交联反应。此外,

衰老细胞曾经一度被认为是“僵尸细胞”：不会增殖也不会死亡，它们只是停留在组织中，通过代谢从微环境中吸收营养物、输送废弃物； 但近些年的研究发现，衰老细胞其实非常活跃而且很“聪明”：它能够通过自我调整来“逃避追踪”，使用特定的蛋白来灭活免疫细胞，从而逃脱免疫系统监控。 在1997年Serrano等人发现了衰老是一种肿瘤的抑制程序，自此打开了关于肿瘤中细胞衰老研究的新世界！ 肿瘤细胞衰老研究方向 目前关于肿瘤中细胞衰老的

菌种活化就是将保藏状态的菌种 放入适宜的培养基中培养 逐级扩大培养得到纯而壮的培养物 即获得活力旺盛的、接种数量足够的培养物 菌种发酵有一般需要2-3代的复壮过程，因为保存时的条件往往和培养时的条件不相同，所以要活化，让菌种逐渐适应培养环境。 01、一般菌种临时存放及活化 1.低温保存管应存放于－20℃ ~ －80℃之低温条件下。 2.准备 37℃之 70﹪酒精浴槽（只能在电气水浴槽中改放酒精，不可以火加温，以免危险；若以 37℃水浴取代

细胞培养是指从体内组织取出细胞在体外模拟体内环境下，使其生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。细胞培养的培养物可以是单个细胞，也可以是细胞系。细胞复苏是细胞培养的重要环节，下面小编具体给大家介绍下细胞复苏的protocal和注意事项！ 01、细胞复苏的原理 细胞复苏是指将冻存在液氮或者-70℃冰箱中的细胞解冻之后重新培养，细胞恢复生长的过程。当恢复到常温状态时，细胞的形态结构保持正常，生化反即刻恢复。细胞复苏

吧友能不能帮忙看看细胞是啥问题呀，没啥贴壁的

免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术 (immunocytochemistry) 是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原 (多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究。它是组织化学的分支，它是用标记的特异性抗体 (或抗原) 对组织内抗原 (或抗体) 的分布进行组织和细胞原位检测技术。 一、免疫组化技术的基本原理 应用免疫学及组织

液氮罐是盛装液氮低温容器，其内外双胆+真空保温特性，能有效减缓液氮的挥发速度，但不能完全阻止液氮的蒸发。然而，冻存细胞通常需要完全淹没在液氮里，才能达到好的冷冻效果。那当液氮罐液氮不够时，对细胞会有影响吗？有什么影响？ 会有以下影响： 1. 细胞冻存质量下降：液氮是细胞冻存的重要冷冻介质，稳定的低温有助于保持细胞的活力和完整性。液氮不足会导致冷冻温度不稳定，可能损坏细胞结构，降低细胞冻存质量。 2. 细胞存活

实验技能分享免疫荧光 免疫荧光（Immunofluorescence，IF）是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一种强大的技术。它的原理是利用荧光标记的抗体作为探针对组织或细胞内的特定抗原进行定位和定性的分析。IF是一个很好的检测技术工具，用于研究感兴趣的产物如分子、蛋白质或糖蛋白的表达、定位、分布和迁移。 免疫荧光检测方法 直接免疫荧光：携带荧光素的抗体直接与抗原反应，形成抗原—荧光素标记抗体复合物。该法优点是较

t值是什么？ qPCR扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的荧光阈值时的所对应的扩增循环数（Cycle Threshold）。C代表Cycle，T代表Threshold。简单讲，Ct值就是qPCR中起始模板扩增达到一定产物量时，所对应的循环数。 为什么要有Ct值？ 模板量与Ct值的关系： 在PCR指数扩增过程当中，产物量与循环数之间的关系是：扩增产物量=起始模板量×（1+En）循环个数。 Ct值的设定： qPCR扩增产物量是以荧光信号的形式直接呈现，也就是扩增曲线。在扩增过程当中，

液氮是一种深低温的液体，其沸点约为-196。56°C。液氮的挥发速度受温度影响很大，夏季温度显然比冬季高很多，那夏季会加速液氮罐内液氮的挥发 对吗？ 对的！ 要知道，厂家给出的静态保存时间大多都是在室温23℃左右的测试结果，也就是夏季空调房的温度，如果你的液氮罐24小时都在这样的环境中，那液氮挥发不受季节影响，但如果是夏季工作人员离开后关闭空调，室内接近30℃，液氮挥发增加属正常现象。 毕竟我们用液氮罐不可能一直不打开

在学习过程中，我们经常会遇到各种PCR字眼，什么qPCR、RT-PCR、RT-qPCR、Real-Time PCR，你了解PCR这个大家族吗？还在傻傻分不清吗？ 一、什么是PCR？ PCR是聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction）的简称，是一种体外扩增特定DNA片段的分子生物学技术。PCR技术自问世以来，在生物科学领域、分子诊断领域、亲子鉴定、法医鉴定以及犯罪调查等方面发挥了巨大作用，是迄今为止最为重要的技术之一。经过演化和革新，PCR技术已经发展了三代：普通PCR技术、实时

Western blot是一个非常基础的实验，但是着实让我们头疼，即使是老手也挡不住WB实验的千锤百炼，懂得都懂，下面小编根据经验总结一篇WB实验过程会遇到的常见问题及解决方案，希望对正在做WB实验的小伙伴提供一个避雷参考！ 无条带 1.蛋白表达量低：充分了解研究的蛋白，表达量低适当增加上样量，20-50μg。 2.本底表达还是诱导表达，非特异性条带。 3.样本提取蛋白使用蛋白酶抑制剂，磷酸酶抑制剂，并设置对照，避免蛋白降解。 4.检查一抗特异性

吉星高照，开工大吉！祝龙年行好运，所盼皆实现！

细胞因子是由免疫细胞（如单核、巨噬细胞、T细胞、B细胞、NK细胞等）和某些非免疫细胞（内皮细胞、表皮细胞、纤维母细胞等）经刺激而合成、分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质。其作用是通过结合相应受体调节细胞生长、分化和效应，调控免疫应答。细胞因子，是细胞分化和行使功能时的产物，相当于人体内各类细胞间相互交的“信使”。它们被广泛地应用于医学诊断、抗癌治疗、免疫调节、以及自身免疫等多种领域。 常见细胞因

提到标准品和对照品，也许还有很多小伙伴并没有真正了解两者的含义和区别，更不能在工作中将两者良好的运用，今天小析姐就汇总了我们工作常见的但是又存在误区的词，这就一定不能漏掉标准品和对照品了，快来看看吧。 1、标准品 对照品与标准品是2个不同的概念，中国药典凡例中已有明确的定义： 对照品系指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质，而标准品系指用于生物检定、抗生素或生物药品中含量或效价测定的标准

提到标准品和对照品，也许还有很多小伙伴并没有真正了解两者的含义和区别，更不能在工作中将两者良好的运用，今天小析姐就汇总了我们工作常见的但是又存在误区的词，这就一定不能漏掉标准品和对照品了，快来看看吧。 1、标准品 对照品与标准品是2个不同的概念，中国药典凡例中已有明确的定义： 对照品系指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质，而标准品系指用于生物检定、抗生素或生物药品中含量或效价测定的标准

求人软骨细胞C-28 I2或者是ATDC5 cells

Western blot的洗液TBST是实验室常用的配制液体，对于TBST的配方也基本上相差不多，其中配方中就有一种组分是Tween-20，一种黄色或琥珀色澄明的油状液体，具有特殊的臭气和微弱苦味。用移液枪吸取时会有一种滞后感。为什么在Western blot的洗液TBST中要加入这么一种试剂，Tween-20在Western blot 中在发挥什么样的作用呢？ 1、Tween-20 首先了解一下什么是Tween-20。Tween-20也写作Tween 20，也称Polyethylene glycol sorbitan monolaurate，中文名为吐温-20或吐温20。Tween-20为黄色或

细胞迁移(Cell migration)：因其类似体外伤口愈合过程，又名伤口愈合实验(Wound healing assay)，是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。可用于可以观察药物、基因等外源因素对细胞迁移、修复和相互作用的影响。 基本原理：在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕/伤口”，划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕/伤口”愈合，于细胞迁移过程中在开始和定期捕获图像，通过测量不同时间点的划痕间距并

免疫组织化学技术：检测组织原位表达的肽类、激素、神经递质、细胞因子、受体、表面抗原等抗原性物质。 免疫 immuno- 抗原抗体的免疫反应 组织 histo- 检测组织中表达的抗原性分子 化学 chemistry 酶促/荧光可见反应 （一）组织和细胞标本的准备 1.组织标本的取材 —— 取材新鲜，固定及时，形态完好。 2. 细胞标本的准备 （1）活体细胞标本： 印片法、穿刺吸取法、沉淀法 （2）培养细胞标本： ① 细胞涂片: 将细胞制成悬液（10^6）涂在 涂有切片粘合

一、普通PCR与荧光定量PCR引物设计上的相同注意点 1.序列的查找是一致的，在NCBI上搜索不同物种的同一基因，序列选取应在基因的保守区段，选择合适片段长度 2.引物长度（primer length）常用的是18-27bp，但不应大于38bp，因为过长会导致其延伸温度太高，不适合 DNA 聚合酶进行反应 3.3’端最好不要有A，5’端可以容忍二聚体，但3’端一定不要有二聚体 4.不要有连续的GGG 或CCC、GCGC、CGCG之类，不要有错配，前后引物的退火温度要差不多，差异在2度以内 5.

随着我国老龄化社会的形成，心脑血管疾患逐渐成为严重影响人们生命健康的最主要疾病。心肌缺血将导致心肌细胞不可逆性坏死，被称为心肌梗死。作为终末分化细胞，大面积心肌细胞梗死将导致严重心脏功能不全危及患者生命及时恢复缺血心肌组织的血液灌注一“再灌注”是治疗急性心肌梗死唯一有效的方法。然而，当缺血心肌再次获得血液灌注后将导致比同时间单纯缺血更加严重的心肌损害，这一矛盾的现象被称为再灌注损伤。心肌缺血再灌注

细胞培养用的培养基是不是必须加双抗？血清在使用之前是不是一定要灭活？往培养基里加细胞因子又是什么操作？ 关于这三个问题，今天在这里分享一下我的看法。 要不要加双抗？ 在培养基中添加抗生素是一种常见的操作，其主要作用是抑制或杀死培养物中的某些细菌或真菌，从而避免它们对目标细胞的干扰和污染。 在培养实验中，选择适当浓度和种类的抗生素，可以有效地消除或减少杂菌、污染菌或其他不需要的微生物，保证培养物的纯度和

1. 贴壁细胞如何进行传代? 去掉原T25培养瓶里面的培养基，T25瓶加3-4 ml PBS洗1-2次;弃PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA (1X)消化液消化细胞，显微镜下观察，待细胞变圆，细胞间隙明显，部分细胞刚开始脱离瓶壁，加4 ml左右完全培养液混匀终止消化，将细胞小心吹打下来，1000 rpm/min室温离心5min;弃上清，细胞沉淀用完全培养液重悬，按要求分瓶(视细胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8)，每T25瓶补足培养基至5-6 ml，37℃、5%CO2孵箱培养。 2. 悬浮性细胞应如何传代处理?